Evaluation of hydroxyurea genotoxicity in patients with sickle cell disease / Avaliação da indução de genotoxicidade pela hidroxiureia em pacientes com doença falciforme

ABSTRACT Objective To evaluate the induction of DNA damage in peripheral blood mononuclear cells of patients with sickle cell disease, SS and SC genotypes, treated with hydroxyurea. Methods The study subjects were divided into two groups: one group of 22 patients with sickle cell disease, SS and SC genotypes, treated with hydroxyurea, and a Control Group composed of 24 patients with sickle cell disease who were not treated with hydroxyurea. Peripheral blood samples were submitted to peripheral blood mononuclear cell isolation to assess genotoxicity by the cytokinesis-block micronucleus cytome assay, in which DNA damage biomarkers - micronuclei, nucleoplasmic bridges and nuclear buds - were counted. Results Patients with sickle cell disease treated with hydroxyurea had a mean age of 25.4 years, whereas patients with sickle cell disease not treated with hydroxyurea had a mean age of 17.6 years. The mean dose of hydroxyurea used by the patients was 12.8mg/kg/day, for a mean period of 44 months. The mean micronucleus frequency per 1,000 cells of 8.591±1.568 was observed in the Hydroxyurea Group and 10.040±1.003 in the Control Group. The mean frequency of nucleoplasmic bridges per 1,000 cells and nuclear buds per 1,000 cells for the hydroxyurea and Control Groups were 0.4545±0.1707 versus 0.5833±0.2078, and 0.8182±0.2430 versus 0.9583±0.1853, respectively. There was no statistically significant difference between groups. Conclusion In the study population, patients with sickle cell disease treated with the standard dose of hydroxyurea treatment did not show evidence of DNA damage induction.

RESUMO Objetivo Avaliar o efeito da indução de danos ao DNA em células monocelulares do sangue periférico de pacientes com doença falciforme, genótipos SS e SC, tratados com hidroxiureia. Métodos Os sujeitos da pesquisa foram divididos em dois grupos: um de 22 pacientes com doença falciforme genótipos SS e SC tratados com hidroxiureia, e o outro controle, composto por 24 pacientes com doença falciforme que não eram tratados com o fármaco. As amostras de sangue periférico foram submetidas ao isolamento de células mononucleares do sangue periférico para avaliação da genotoxicidade pelo ensaio de micronúcleo citoma com bloqueio da citocinese, tendo sido quantificados os biomarcadores de danos ao DNA - micronúcleos, pontes nucleoplasmáticas e brotamento nuclear. Resultados Os pacientes com doença falciforme tratados com hidroxiureia apresentaram média de idade de 25,4 anos, enquanto aqueles com doença falciforme não tratados com hidroxiureia tiveram média de idade de 17,6 anos. A dose média de hidroxiureia utilizada pelos pacientes foi de 12,8mg/kg/dia, por período médio de 44 meses. A frequência média de micronúcleos por 1.000 células de 8,591±1,568 foi observada no Grupo Hidroxiureia e de 10,040±1,003 no Grupo Controle. Adicionalmente, a frequência média de pontes nucleoplasmáticas por 1.000 células e brotamento nuclear por 1.000 células para o Grupo Hidroxiureia e Controle foi de 0,4545±0,1707 versus 0,5833±0,2078, e de 0,8182±0,2430 versus 0,9583±0,1853, respectivamente. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos. Conclusão Na população estudada de pacientes com doença falciforme com tratamento em dose padrão de hidroxiureia, não houve evidência de indução de danos ao DNA.

Analysis of corneal esthesia in patients undergoing photorefractive keratectomy / Análise da estesia corneal em pacientes submetidos à ceratectomia fotorrefrativa

ABSTRACT Purpose: To quantitatively analyze corneal esthesia in patients undergoing photorefractive keratectomy (PRK) surgery. Methods: Forty-five patients selected for PRK in one eye underwent corneal esthesia using a Cochet-Bonnet esthesiometer preoperatively and 30 and 90 days postoperatively. Patients with a refractive diopter error of 4 or greater received intraoperative 0.02% mitomycin C for 20 s. Results: Twenty-four (53.3%) of the 45 eyes received intraoperative 0.02% mitomycin. Decreased sensitivity was observed on postoperative day 30. By postoperative day 90, corneal esthesia had normalized but remained 14.9% lower than preoperative levels. In the mitomycin group, no recovery of corneal esthesia to normal sensitivity levels was observed. The mean esthesiometer level was 39.2 mm on postoperative day 90 (P<0.001). Conclusions: The results of the present study demonstrate recovery of corneal esthesia to normal levels at 90 days postoperatively in patients who did not receive mitomycin C. In patients administered mitomycin C, a 23.59% reduction in the corneal touch threshold was observed compared with preoperative levels indicating a failure of recovery to normal levels.

RESUMO Objetivo: Análise quantitativa da estesia corneal em pacientes submetidos à cirurgia refrativa (PRK). Métodos: Estudo prospectivo, longitudinal e intervencionista, analisando 45 olhos com estesiômetro de Cochet Bonnet no período pré-operatório, no 30º dia após a cirurgia e no 90º dia após cirurgia refrativa. Os pacientes com erro refracional maior ou igual a 4 dioptrias, foram submetidos ao uso de mitomicina 0,02%, por período de 20 segundos no intraoperatório. Resultados: Observou-se diminuição da sensibilidade corneal no 30º dia em todos os olhos, retornando a níveis próximo ao normal no 90º dia, apresentando redução média final de 14,9%. Mitomicina C foi utilizada em 24 (53,3%) dos 45 olhos examinados. No grupo que recebeu mitomicina C, não houve recuperação da estesia normal (média de 39,2 mm) (p<0,001), após 90 dias de cirurgia. Conclusão: Com base nos resultados obtidos, verificamos que ocorreu recuperação da estesia corneal próximo ao normal 90 dias após a cirurgia, porém inferior aos valores iniciais, no grupo sem o uso de mitomicina C intraoperatória. No entanto, no grupo submetido ao uso de mitomicina, não houve a recuperação da sensibilidade corneal a níveis normais, mesmo após o período de 90 dias.

Ação do anestésico tópico diluído e da mitomicina sobre a sintomatologia e re-epitelização corneana no pós-operatório da ceratectomia fotorrefrativa / The action of topic diluted anesthetic and mitomycin on the symptomatology and corneal re-epithelialization at postoperative photorefractive keratectomy

Objetivo: Avaliar a ação do anestésico tópico proximetacaína diluído, sobre a sintomatologia e re-epitelização corneana no pós-operatório de ceratectomia fotorrefrativa (PRK). Métodos: Estudo prospectivo, comparativo e duplo cego. Os pacientes foram divididos em dois grupos: Com (n=32) e Sem (n=24) o uso de mitomicina C 0,02% no intraoperatório (indicada para ametropia igual ou acima que 4 dioptrias). Cada paciente recebeu dois frascos de colírio: um com a lágrima artificial carmelose sódica 0,5% como placebo e o outro com a mesma acrescida do anestésico proximetacaína a 0,125%. A escolha do olho a receber um ou outro colírio foi aleatória. Cada paciente foi questionado, no 1º, 2º e 3º pós-operatórios, sobre o tipo de sintoma apresentado em cada olho e sua intensidade (medida por meio da Escala Analógica Visual de Dor). O estado da re-epitelização corneana de cada olho foi avaliado no 1º e 5º dias pós-operatórios. Resultados: Os escores da intensidade da sintomatologia foram significativamente menores nos olhos que utilizaram anestésico, tanto para os pacientes do grupo que recebeu mitomicina como para os pacientes do grupo que não. A diminuição da sintomatologia foi significativamente maior nos olhos que receberam concomitantemente o anestésico e a mitomicina. Ocorreu retardo da re-epitelização corneana em apenas 3 casos do grupo que utilizou mitomicina. Conclusão: O anestésico tópico diluído na concentração e posologia propostas neste estudo mostrou-se seguro e não tóxico ao epitélio cornenano, proporcionando alívio significante da sintomatologia pós-operatória do PRK. Quando associados, o anestésico tópico diluído e a mitomicina apresentaram uma ação sinérgica nesse alívio.

Objective: To evaluate the effects of diluted topic anesthetic proximetacaine on the symptoms and corneal re-epithelialization in postoperative photorefractive keratectomy (PRK). Methods: A prospective, comparative and double-blind Study. Patients were divided into two groups: With (n=32) and Without (n=24) the use of Mitomycin C at 0.02% (indicated for eyes with 4 or more diopters). Each patient received two bottles of eye drops one had artificial tear carmellose sodium 0.5%, and other had the same along with 0.125% proximetacaine. The choice of which eye would receive one or another was random. Each patient was asked, at the 1st, 2nd and 3rd postoperative days, about the type of presenting symptom on each eye and its intensity (assessed by Pain Visual Analogue Scale). The corneal re-epithelialization of each eye was evaluated at the first and fifth postoperative days. Results: The scores were significantly lower in the eyes in which anesthetic was used for both groups. The decrease in symptomatology was significantly superior in the eyes that received concomitantly the diluted anesthetic and the mitomycin when compared to the eyes that received only the anesthetic. There were only three cases of corneal re-epithelialization retardation in mitomycin group. Conclusion: The diluted proximetacaine, at the concentration and dosage proposed in this study, is safe and non-toxic to the corneal epithelium, providing significant relief for PRK postoperative symptoms. When combined, the diluted symptoms.

Efeitos de algumas drogas sobre a proliferação de fibroblastos de pterígio primário in vitro / Effects of some drugs in the fibroblastic proliferation in primary pterygium in vitro

OBJETIVO: Este estudo tem por objetivo observar a inibição da proliferação celular in vitro em pterígios primários utilizando mitomicina C, ciclofosfamida e metotrexato. MÉTODOS: Os pterígios foram retirados de 7 pacientes com idade entre 30 e 60 anos e foram submetidos à cultura de suas células epiteliais. Foi então verificado o efeito de drogas sobre as células: ciclofosfamida, metotrexato e mitomicina. As células foram observadas por 5 dias ao microscópio para avaliar a proliferação celular e os experimentos foram repetidos 5 vezes. RESULTADOS: Quando a mitomicina foi utilizada observou-se importante inibição da proliferação celular. Quando a ciclofosfamida foi utilizada houve também inibição do crescimento, 50% após 24 horas de cultura após a exposição da droga aumentando nos dias subsequentes. Nenhum efeito foi observado quando o metotrexato foi utilizado. CONCLUSÃO: Os efeitos de inibição da proliferação celular pela mitomicina C já eram esperados, porém a ciclofosfamida também apresentou-se bastante eficaz. A ação inibitória da ciclofosfamida sobre a proliferação fibroblástica in vitro nos leva a acreditar que ela possa ser usada para prevenir a recorrência do pterígio depois da excisão. Entretanto, testes em animais e posteriormente em humanos se fazem necessários para se chegar a essa conclusão.

OBJECTIVE: This study aims at observing the inhibition of cell proliferation in primary pterygium by the use in vitro of mitomicyn C, cyclophosphamide, methotrexate. METHODS: Pterigyum was removed from seven pacients between 30 and 60 years and were submitted to culture of epithelial cells. Later the effect of drugs was tested on the cells: cyclophsphamide, methotrexate, mitomicyn. The cells were observed for five days under the microscope to assess cellular proliferation, and the experiments were repeated five times RESULTS: When mitomicyn was used, a marked inhibition of cellular proliferation was observed. When cyclophosphamide was used there also was inhibition of cellular proliferation, 50% within 24 hs of the culture exposition to the drug increasing in the following days CONCLUSION: The inhibition effects in the cellular proliferation by the use of mitomicyn C was already expected, but the use of cyclophosphamide was also very effective. The cyclophsphamide inhibitory action on fibroblastic proliferation in vitro lead us to believe that it may be used to prevent pterygium recurrence after incision. However, tests in animals and later in humans are necessary.

The use of mitomycin C in caustic esophagitis in rats

PURPOSE: To evaluate the topical effects of mitomycin C (MMC) in rats, with or without esophageal dilation, in different moments after esophageal caustic injury with NaOH10%. METHODS: Forty eight Wistar rats were divided into six groups: "GS" infusion of 0.9% saline solution in the esophagus; "CG" infusion of 0.9% saline solution in the esophagus, with temporary ligation of the organ; "NTG" induction of a caustic lesion without treatment; "GmmcD0" MMC applied immediately after the caustic injury; "GmmcD14" MMC applied 14 days after the caustic injury; "Gdil+mmcD14" esophageal dilation and application of MMC 14 days after caustic injury. We performed contrast esophagograms of four animals from each group, seven and 21 days after the caustic injury. On day 28, all animals were sacrificed, and histopathological analyses were performed on the esophageal specimens. RESULTS: The contrast images showed total stenosis in NTG and GmmcD0, improving to partial stenosis in GmmcD0. In GmmcD14 and Gdil+mmcD14, two animals of each group improved to partial stenosis. By histopathological analysis, NTG and GmmcD14 presented intermediate damage and GmmcD0 and Gdil+mmcD14 severe damage. CONCLUSION: The use of mitomycin C had beneficial effects specially when applied immediately after the induction of esophageal lesions.

Comparative Study of Encapsulated Blebs Following Ahmed Glaucoma Valve Implantation and Trabeculectomy with Mitomycin-C

PURPOSE: To compare the histopathologic and morphologic findings of encapsulated blebs following Ahmed glaucoma valve implantation and primary standard trabeculectomy with mitomycin-C. METHODS: We reviewed the records of patients with otherwise uncontrollable glaucoma who had undergone Ahmed glaucoma valve implantation or trabeculectomy with mitomycin-C. Five eyes that underwent Ahmed valve implantation and three eyes that underwent trabeculectomy needed surgical revision of the initial surgery due to encapsulated bleb development with total loss of function. The surgically removed encapsulated blebs were analyzed macroscopically and microscopically. RESULTS: Removal of the encapsulated bleb was performed at a mean follow-up time of 26.6 +/- 19.4 weeks in the Ahmed valve implantation group and 12.0 +/- 11.4 weeks in the trabeculectomy group. The fibrotic wall of the encapsulated blebs had an overall thickness of 2.48 +/- 0.42 mm in the Ahmed valve implantation group and 1.62 +/- 0.37 mm in the trabeculectomy group. Macroscopically, the coconut flesh-like smooth surface was split into two layers, and the wall of the capsule was thicker in the Ahmed valve implantation group than in the trabeculectomy group. Histopathologically, the fibrotic capsule was composed of an inner fibrodegenerative layer and an outer fibrovascular layer, and there were no histopathological differences between the two groups. CONCLUSIONS: The fibrotic capsule wall was thicker in the Ahmed valve group, but there were no differences in histological findings between the two groups.

Efeito da mitomicina C em polipose nasossinusal eosinofílica, in vivo: dosagem de IL5 e GM-CSF, RT-PCR / Effect of mitomocin C in eosinophilic nasal polyposis, in vivo: concentration of IL5 and GM-CSF, RT-PCR

A polipose nasossinusal eosinofílica (PNS) é manifestação de uma doença inflamatória crônica na mucosa do nariz e nos seios paranasais caracterizada por infiltração de granulócitos eosinófilos. O fator responsável pela eosinofilia e manutenção dessas células com a perpetuação do processo inflamatório e formação polipóide é objeto constante de estudos. As citocinas como IL5 (interleucina 5) e GM-CSF (fator estimulador de colônia granulócito macrófago) aumentam a sobrevida dos eosinófilos e prolongam a sua presença no tecido polipóide, diminuindo o índice de apoptose eosinofílica. OBJETIVO: Avaliar o efeito da mitomicina C - MMC - por meio de aplicação tópica em pacientes portadores de PNS eosinofílica quanto à presença de IL5 e GM-CSF. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Quinze pacientes portadores de PNS eosinofílica foram submetidos à aplicação tópica de MMC na concentração de 0,5mg/ml, 1ml, durante cinco minutos, na cavidade nasal direita, e submetidos à biópsia para RT-PCR 24hs após. O grupo-controle foi a cavidade nasal esquerda. O perfil de citocinas foi analisado para IL5 e GM-CSF. RESULTADOS: A comparação dos resultados de GM-CSF pré e pós-uso de MMC quando usamos o teste t pareado apresenta p=0,041. A comparação para IL5 resulta em p < 0,001. CONCLUSÃO: O uso de MMC em pacientes com PNS mostra redução com significância estatística par GM-CSF e importante significância para IL5.

Eosinophilic nasosinusal polyposis is a chronic inflammatory infection with elevated infiltration of eosinophils, which presents high rate of recurrence after surgical treatment. The continuous inflammatory process that leads to the formation of polyps requires constant clinical treatment. Contributing to the maintenance of eosinophilia are cytokines IL5 (interleukin-5) and GM-CSF (granulocyte macrophages colony-stimulating factor), which show up in elevated concentrations. These oligoproteins diminish the rate of apoptosis and prolong the survival of eosinophils. AIM: By diminishing these cytokines, the action of Mitomycin C (MMC), an antineoplasic drug which inhibits the synthesis of DNA, was studied. In a recent study the power of this drug to cause apoptosis in eosinophils, in vitro, of nasal polyps was verified. METHODOLOGY: A biopsy of the nasal polyps was undertaken in 15 patients carriers of eosinophilic nasosinusal polyposis 24 hours after applying 0.5 mg/ml of MMC during five minutes. RT-PCR (reverse transcription of polymerase chain reaction) for IL5 and GM-CSF was the method used to obtain the results. RESULTS: The comparison of the results of GM-CSF pre- and post-application of MMC, when the paired T-test was used, showed p=0.041 and for IL5 we found p<0.001. CONCLUSION: Topic use of MMC in patients with eosinophilic nasosinusal polyposis shows statistically significant reduction for GM-CSF and significant and important reduction for IL5.

Resultado a longo prazo do uso de drogas antiproliferativas na trabeculectomia primária / Long-term outcomes of antiproliferative agents in primary trabeculectomy

Objetivo: Avaliar comparativamente a longo prazo os resultados cirúrgicos de trabeculectomias nas quais foram utilizadas injeções subconjuntivais de 5-fluorouracil (5-FU) no pós-operatório ou aplicações de mitomicina C (MMC) peroperatória. Métodos: Estudo retrospectivo de 133 olhos submetidos a trabeculectomia primária. Resultados: A pressão ocular não apresentou valores estatisticamente significantes em nenhuma das visitas de pós-operatório quando comparados os grupos em que se utilizou a mitomicina C ou 5-fluorouracil. Em cada um dos grupos analisados separadamente, os níveis da pressão ocular não apresentaram diferenças estatisticamente significantes nos períodos pré e pós-operatório. A incidência de complicações pós-operatórias também não apresentou diferença estatisticamente significante à exceção de alterações epiteliais na córnea, mais freqüentes no grupo tratado com 5-fluorouracil, Nos dois grupos, destacou-se a elevada incidência de desenvolvimento/progressão de catarata. Conclusão: O uso de mitomicina C ou 5-fluorouracil promoveu redução importante e estável da pressão ocular, com índices de complicações semelhantes.

Regeneraçäo do epitélio corneano central após o uso tópico de mitomicina C / Regeneration of central corneal epithelium after the topical use of mitomycin C

OBJETIVO: Avaliar se o uso de mitomicina C, em olhos submetidos a uma ressecçäo conjuntival, deixando-se a esclera nua, influencia na reparaçäo de defeitos epiteliais corneanos realizados imediatamente após a suspensäo da droga. MATERIAL E MÉTODOS: Vinte e uma coelhas, aleatoriamente divididas em três lotes de 7 animais, foram submetidas a ressecçäo de retalho conjuntival temporal justalímbico de 5mm de extensäo por 3 mm de largura, deixando-se a esclera exposta. Doze horas após este ato cirúrgico iniciou-se a instilaçäo de colírios de mitomicina C a 0,02 por cento (14 olhos), a 0,04 por cento (14 olhos) e soluçäo de cloreto de sódio a 0,90 por cento (14v olhos controles) 2 gotas, 2 vezes ao dia, por 5 dias. Doze horas depois da última instilaçäo dos colírios, realizou-se um defeito epitelial corneano central de 7,75 mm de diâmetro. A avaliaçäo qualitativa do epitélio regenerado foi avaliada com exames biomicroscópicos e a quantitativa foi realizada a partir de fotografias seriadas. Ao final do experimento 4 olhos medicados com cada uma das concentraçöes da droga e 8 olhos controles foram enucleados e suas córneas examinadas por histopatologia (coloraçäo com HE) e imuno-histoquímica (PCNA). RESULTADOS: Durtante a instilaçäo de colírios observou-se hiperemia conjuntival em 28,57 por cento dos olhos que utilizaram mitomicina C a 0,02 por cento, em 35,71 por cento dos olhos que utilizaram a medicaçäo a 0,04 por cento e em nenhum dos olhos-controle. Na avaliaçäo realizada em 20 horas os olhos medicados com mitomicina C apresentaram pior qualidade do epitélio regenerado em relaçäo aos olhos-controle. Näo houve diferença significativa entre os valores dos coeficientes angulares médios das retas de cicatrizaçäo, obtidos dos olhos submetidos aos diferentes tratamentos. Os achados histopatológicos e imuno-histoquímicos (PCNA) foram semelhantes nas córneas dos olhos-controle e medicados. Observou-se 3 a 4 camadas de células epiteliais, atipia celular discreta e 100 por cento de coloraçäo para o PCNA das células epiteliais basais e uma célula por campo de grande aumento nas camadas epiteliais superiores. No estroma notou-se faixa estreita de homogeneizaçäo de colágeno e presença de infiltrado inflamatório linfomononuclear discreto no centro das córneas. CONCLUSÖES: Os resultados desta investigaçäo, nas condiçöes deste estudo, mostraram que o uso prévio de colírio de mitomicina C em olhos com esclera nua näo influenciou na reparaçäo de defeitos epiteliais...